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- 发布时间
- 2022-09-20 02:48:31
拉曼光谱仪怎样避免被测试的样品被激光烧毁？
当你进行样品测试时，激光照射在样品表面的能量是非常大的，尤其在采用NIR或UV激光激发时。尤其是一些样品在光照下对热或光是十分敏感的，这会导致测量信号包含样品烧毁后的特征，而不是样品本征的信号(例如，非晶碳膜在1500cm-1波数附近的本征峰在强光激发时会显示出石墨化的碳峰)。通常遇到这样的问题时，可在样品测试前后通过显微镜白光像观察样品表面是否发生明显变化，便携式拉曼光谱公司，因此需选择正确的激光功率来进行测试。
为避免样品表面烧毁，在开始测试时应选用较低的激发功率，尤其用NIR或UV激光激发时。在保证样品不被烧毁的前提下可提高激发功率以得到很强的信号。当激光功率衰减到1％仍无法避免样品烧毁时，可考虑转换低倍物镜以降低照射在样品表面的功率密度。另外还可采用欠焦照射模式或线聚焦照射模式。如果问题是由于高功率二极管激光器引起的，可考虑转换成低功率可见激发系统。
拉曼光谱仪
1. 曾经一度怀疑线性CCD坏掉了，劝老板再买一个，便携式拉曼光谱原理，可老板坚持说不可能的，(没可能坏的啦)。事实证明他是对的。
2. 将拉曼光谱从显微镜光路拆下，倒置固定在光学平台上。
3. 仔细观察光路，拆下大部分零件，拆前拍照记下原始位置。Fig. 4
4. 用白胶水粘紧光栅与反射镜。
5. 拆下两块滤光片，用一块反射镜反射回去，微调半透半反镜并用小孔检查光路，廊坊便携式拉曼光谱，让入射光与出射光重合，使反射光透过pinhole，并且在CCD 镜头前看到光栅散射出的长条光斑。
6. 仔细调节Laser diode 后方的三个调整螺丝，便携式拉曼光谱价格，同时微调Pinhole的位置（上方两个机米螺丝，下方一个弹性机米螺丝，前方两个紧固螺丝），使透过Pinhole的光强达到大且光路共轴垂直。耐心缓慢旋转每一个旋钮体会光斑的强度与移动趋势。（难的一步）
7. 将外壳从光学平台卸下并封装好，复原。倒置接回显微镜光路，并仔细调两个反射镜的四个旋钮，使光斑在屏幕正中央。
8. 安装后，调节显微镜的上方卤灯的明暗，观察到有信号强弱的变化，若没有，拆掉，重复上述步骤 2-7。
9. 观察到明暗，使用标准样品，用长积分时间（20s），观察到拉曼信号。Fig.7（a）
10. 使用软件上的校准功能(Specify calibration peaks)，用polystyrene样品重新校准。
11. 拆下再次做细微调整让信号强。Fig.7（b）
拉曼光谱在生物学研究中的应用
拉曼光谱是研究生物大分子的有力手段，由于水的拉曼光谱很弱、谱图又很简单，故拉曼光谱可以在接近自然状态、活性状态下来研究生物大分子的结构及其变化。
生物大分子的拉曼光谱可以同时得到许多宝贵的信息：
（1）蛋白质二级结构：α-螺旋、β-折叠、无规卷曲及β-回转
（2）蛋白质主链构像：酰胺Ⅰ、Ⅲ，C-C、C-N伸缩振动
（3）蛋白质侧链构像：苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸的侧链和后二者的构像及存在形式随其微环境的变化
（4）对构像变化敏感的羧基、巯基、S-S、C-S构像变化
（5）生物膜的脂肪酸碳氢链旋转异构现象。
（6）DNA分子结构以及和DNA与其他分子间的作用。
（7）研究脂类和生物膜的相互作用、结构、组分等。
（8）对生物膜中蛋白质与脂质相互作用提供重要信息。