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- 2022-09-20 17:29:59
组织样本需预先冰冻于液氮中。在不锈钢研钵中用液氮将组子样本研磨成精细粉末。待液氮挥发完后,称量冰冻组织样本并加入10倍体积的0.1M HCl混匀。室温以大于600g离心力离心,取上层清夜用0.1M HCl稀释至适当浓度。
ELISA检测试剂盒应用定性夹心免l疫检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗l体,这些抗l体就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗l体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与头一次孵育结合上的HEV IgM抗l体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,人环磷酸腺苷 cGMP ELISA,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM抗l体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM抗l体elisa试剂盒的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。