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免0疫佐剂简称佐剂，即非特异性免0疫增0生剂，指那 些同抗原一起或预先注入机体内能增强机体 对抗原的免0疫应答能力或改变免0疫应答类型 的辅助物质。佐剂可以具有免0疫原性，也可无免0疫原性。佐剂种类很多，目前尚无统一 的分类方法，应用zui多的是弗氏佐剂和细胞0因子佐剂。佐剂的免0疫生物学作用是增强免0疫原性、增强抗0体的滴度、改变抗0体产生的类型、引起或增强迟发超敏反应，但佐剂的 作用机制尚未完全明了，不同佐剂作用的机 制也不尽相同。

抗原制备及纯化

抗原制备: 参照文献［10］制备 MRJ 抗原。复苏pET28a-mrj 转 Rosetta 菌0种 接 种 于 具 Kana 抗 性 的10 mL液体培养基中的，37 ℃ 培养过夜，次日以 1∶ 50转瓶进行扩大培养，当菌液 OD600达 0． 6 时加入浓度为 5 mmol /L 的 IPTG，37 ℃ 诱导 8 h 超声碎裂后进行考马斯亮蓝染色检验，有目的蛋白的大量表达。抗原大量制备及纯化: 以 5 × 10 -4 mol /L 浓度的IPTG，37 ℃ 条件下大量诱导( 200 mL 菌液) 8 h 后收集样品，超声裂解后将所得 MRJ 蛋白过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化，考马斯亮蓝染色后检测目的蛋白纯度高于 90% ，可用于单克0隆抗0体制备动物免0疫的抗原。

1. 第21天按同样方式加强免0疫1针。备注：每次佐剂和抗原现配现用。

2. 第35天采微量血进行ELISA测定，抗0体滴度应在1:10000-1:10000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免0疫和脾细胞融合。

3. 若抗0体滴度没有达到要求，无缝kelong（试剂盒），可在第42天按同样方式加强免0疫1针。备注：通常情况下小鼠只需免0疫2针，而家兔往往需要免0疫3针。

4. 若免0疫3针，可在第52-56天采微量血进行ELISA测定，抗0体滴度应在1:10000-1:1000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免0疫和脾细胞融合。备注：佐剂免0疫效果有时也与抗原特性有关，若免0疫3针后仍达不到要求，不建议进行更多针次免0疫。

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