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- 发布时间
- 2022-10-03 17:52:14
层析柱与液相柱的区别
1、压力
液相色谱柱(尤其是分析性液相色谱):压力较高,一般为10-20Mpa
层析柱:一般为常压,或使用真空泵(0.1Mpa左右)
2、填料
液相色谱柱:粒径较小(常规5-20um)
层析柱:粒径较大
3、分离度
由第二项决定,粒径越小,单位长度下理论塔板数越高
液相色谱柱:分离度比层析柱好
4、效率
液相色谱柱:分离速度快,阴阳树脂柱多少钱,一般在一小时内
层析柱:分离时间长,一小时以上
层析柱的操作方法
以中压柱层析法提取分离冬凌草甲素为例:
1.吸附剂的处理及柱子装填
将一定量薄层层析硅胶装入搪瓷盘置于烘箱中,于105。C活化2H后,取出放置室温即可装柱。柱子采用干法填充,填满整个柱体,阴阳树脂柱供应,不留死体积,密封后用柱塞式计量溶剂泵按一(5:95)比例泵入溶剂,至溶剂流出止。
2.上样
将冬凌草的乙醇提取物400G用适量溶解,泵入中压柱柱头,阴阳树脂柱价格,然后泵入1000RID。
3.洗脱
以一定比例的一为洗脱液,60ML/MIN的流速进行梯度洗脱,柱的使用压力为2~ 3KG/C 。按每份500ML收集,TLC检识展开剂一(2:8),显色剂5%香草醛乙醇液
至洗脱完全,相同流份合并,回收溶剂。将冬凌草甲素流份合并蒸干。加入适量热溶后自然放置,析出结晶,为冬凌草甲素。
平衡柱子
即用洗脱剂中极性小的溶剂(例如、、等)用计量泵(或氮气)打入(压入)层析柱上端。此溶剂因极性小于硅胶,不会把吸附在硅胶上端面的物料中有用物质洗脱下来,阴阳树脂柱,而只能将物料中的极性很小的油脂等杂质洗下。另外,此过程还可以将柱中硅胶中的大量空气往下赶出柱外。这个过程俗称“平衡”柱子或“平衡”吸附剂。可使硅胶被溶剂浸润,且排出空气,有利于续后的洗脱分离过程。
当平衡用的溶剂从柱下流出后,可以停止此过程,改用洗脱剂洗脱分离过程;平衡过程也可以再理行一段时间,将柱子中的空气多排出一些,但溶剂耗量也会增加。