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层析柱装柱、使用及相关注意事项

关于层析柱装柱、使用及相关注意事项

（1）、装柱前要仔细看填料的使用说明书，每种填料都有自己的特性，以及特殊的装柱方法，针对不同的空柱，也要注意方法可能不同；这一点非常重要：装柱包括以后使用中不允许柱内进入气泡（bubble free），柱头事先也要排除气泡。

（2）、填料要加水搅拌成均匀悬液，悬液浓度依填料而不同，一般70－85%，迅速倒入空柱内，或吸或压，流速和具体步骤看说明书。

（3）、所有柱子尽量做到填料均匀，尤其是用于凝胶层析的柱子。装柱完成后，树脂柱厂家供应，可用柱效测定的方法检查装填效果。一个装填合格的柱子的理论塔板高度应是填料平均粒径的2－4 倍，在此范围内越小越好。

（4）、选择合适的泵，**是流速满足要求，脉冲尽量小。柱塞泵。

（5）、准备上柱的液体应进行过滤，至少是0.45micrometre。

（6）、关于纯化，**要考虑的是你的目标：纯度、数量、速度、收率等等，再根据样品的具体情况，尤其是目标蛋白的性质，确定纯化策略。通常三步曲：capture、purification、polishing。*步先从大量或复杂样品中将目标蛋白%26ldquo;抓出%26rdquo;，与主要杂质分离；再用高选择性的层析去除绝大部分杂质；后精细纯化，提供纯度至设定目标。到实际工作中，不要死靠三步，也许一步也许四步或更多，具体情况具体分析。所谓%26ldquo;三步%26rdquo;只是一种思路而已。

（7）、至于测序，我想大概不到1mg 应该足够了。

平衡柱子即用洗脱剂中极性小的溶剂

平衡柱子

即用洗脱剂中极性小的溶剂（例如、、等）用计量泵（或氮气）打入（压入）层析柱上端。此溶剂因极性小于硅胶，不会把吸附在硅胶上端面的物料中有用物质洗脱下来，而只能将物料中的极性很小的油脂等杂质洗下。另外，此过程还可以将柱中硅胶中的大量空气往下赶出柱外。这个过程俗称“平衡”柱子或“平衡”吸附剂。可使硅胶被溶剂浸润，且排出空气，树脂柱生产厂家，有利于续后的洗脱分离过程。

当平衡用的溶剂从柱下流出后，可以停止此过程，改用洗脱剂洗脱分离过程；平衡过程也可以再理行一段时间，将柱子中的空气多排出一些，树脂柱厂家现货，但溶剂耗量也会增加。

影响大孔吸附树脂吸附性能的主要因素　　大孔吸附树脂的分离效果受溶液的pH值、吸附质的极性、分子大小、树脂柱的清洗和洗脱液的种类等因素制约，同时也与外界的温度和压强有关。影响其吸附性能的主要因素如下:(1)大孔吸附树脂的比表面积越大，一般吸附性能越好，吸附量越多。(2)大孔吸附树脂的孔径越大，吸附质分子在孔内的扩散速度也越大，有利于达到吸附平衡。经验表明，当吸附剂孔径与吸附质分子的直径比为6∶ 1左右时，吸附性能佳。(3)随着孔容的增加，大孔吸附树脂的吸附量增加。(4)大孔吸附树脂孔径的大小，直接影响不同大小分子的自由进入，从而使树脂吸附具有选择性。只有当孔径对于被吸附组分足够大时，比表面积才能充分发挥作用，且大孔吸附树脂的孔径分布越窄，吸附性能越好。(5)极性树脂较易吸附极性物质，非极性树脂较易吸附非极性物质。(6)若大孔吸附树脂上的功能基团与吸附质分子之间可以形成氢键或电子转移络合物，则有较强的吸附作用。(7)大孔吸附树脂的吸附一般都是放热过程，温度升高，吸附量将减少。(8)压强是影响大孔吸附树脂吸附的因素之一，压强越大，吸附量越多，石家庄树脂柱厂家，而吸附速率也随着压强的增大而增大。(9)当溶液中存在两种以上溶质时，往往会引起一种溶质易吸附而另一种溶质的吸附量降低，一般来讲，对混合溶质的吸附较纯溶质的吸附效果差。(

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