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平衡柱子即用洗脱剂中极性小的溶剂

平衡柱子

即用洗脱剂中极性小的溶剂（例如、、等）用计量泵（或氮气）打入（压入）层析柱上端。此溶剂因极性小于硅胶，长春阴阳树脂柱，不会把吸附在硅胶上端面的物料中有用物质洗脱下来，而只能将物料中的极性很小的油脂等杂质洗下。另外，此过程还可以将柱中硅胶中的大量空气往下赶出柱外。这个过程俗称“平衡”柱子或“平衡”吸附剂。可使硅胶被溶剂浸润，且排出空气，有利于续后的洗脱分离过程。

当平衡用的溶剂从柱下流出后，可以停止此过程，改用洗脱剂洗脱分离过程；平衡过程也可以再理行一段时间，将柱子中的空气多排出一些，但溶剂耗量也会增加。

冬凌草甲素样品的操作方法

层析柱的操作方法1.层析柱再生、平衡有效成分经TLC检识全部流出后，用纯5000ML再生，一(5：95)平衡后，可再次上样，反复使用(使用次数随原料不同而异，阴阳树脂柱厂家，一般可连续使用2—6个月以上)。2.重结晶冬凌草甲素结晶析出完全后，减压过滤，阴阳树脂柱供应，然后用少量洗涤(洗涤液保留，作下次热溶冬凌草甲素用)。将冬凌草甲素再用适量热溶后放置，结晶再次析出，待结晶完全后，抽滤，用少量洗涤，将结晶室温下晾干后置真空干燥箱中，35度真空干燥至恒重。密封于瓶中，置干燥器中保存。3.薄层层析分析取适量冬凌草甲素对照品及由上述方法得到的冬凌草甲素样品溶解后点于同一硅胶G薄层板上，以一(8：2)为展开剂进行展开，5% 香草醛乙醇液显色，于105。C烘至斑点清晰。表明在该展开系统下，冬凌草甲素样品和对照品都具有相同的RF值，并呈现出同样的蓝绿点，在制备的冬凌草甲素样品中，没有杂质斑痕。

层析柱装柱步骤流程

1.HETP计算

所用样品为1.0%NaCl或纯溶液，上样大约为总柱床体积的1%。对于34和50μm的填料，使用的线性流速应为30 cm/h，90μm的填料选择20 cm/h的线性流速。通过下式计算HETP:

HETP = L/N

其中L为柱床高度（cm），N为理论塔板数，N=5.54 (Ve/Wh)2；

Ve为洗脱体积（mL），阴阳树脂柱多少钱，Wh峰高一半处的峰宽（mL）。

2.峰对称因子计算

洗脱峰的峰形应尽可能对称，即对称因子尽可能接近1。As按下列公式计算：

As = b/a

其中，a为峰高10%处的前半个峰宽，b为峰高10%处后半个峰宽。

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