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- 发布时间
- 2022-10-10 03:43:26
关于层析柱装柱、使用及相关注意事项
（1）、装柱前要仔细看填料的使用说明书，每种填料都有自己的特性，以及特殊的装柱方法，针对不同的空柱，也要注意方法可能不同；这一点非常重要：装柱包括以后使用中不允许柱内进入气泡（bubble free），柱头事先也要排除气泡。
（2）、填料要加水搅拌成均匀悬液，悬液浓度依填料而不同，一般70－85%，迅速倒入空柱内，或吸或压，流速和具体步骤看说明书。
（3）、所有柱子尽量做到填料均匀，尤其是用于凝胶层析的柱子。装柱完成后，可用柱效测定的方法检查装填效果。一个装填合格的柱子的理论塔板高度应是填料平均粒径的2－4 倍，在此范围内越小越好。
（4）、选择合适的泵，**是流速满足要求，脉冲尽量小。柱塞泵。
（5）、准备上柱的液体应进行过滤，至少是0.45micrometre。
（6）、关于纯化，**要考虑的是你的目标：纯度、数量、速度、收率等等，再根据样品的具体情况，尤其是目标蛋白的性质，确定纯化策略。通常三步曲：capture、purification、polishing。*步先从大量或复杂样品中将目标蛋白%26ldquo;抓出%26rdquo;，层析柱生产商，与主要杂质分离；再用高选择性的层析去除绝大部分杂质；后精细纯化，提供纯度至设定目标。到实际工作中，不要死靠三步，也许一步也许四步或更多，具体情况具体分析。所谓%26ldquo;三步%26rdquo;只是一种思路而已。
（7）、至于测序，我想大概不到1mg 应该足够了。
事半功倍的不锈钢层析柱使用技巧
加压过柱是一种比较好的方法， 与常压柱类似， 但用外加压力可以使淋洗剂走的快些。压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵 （用鱼缸供气的加压泵就行）。特别是在容易分解的样品的分离中很适用。
一般压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。因为加压过柱， 分离效果较好，层析柱多少钱， 所以加压过柱在普通的有机化合物的分离中是非常适用的。
一些低沸点溶剂装柱时往往会在柱子中产生气泡， 使柱子变花， 利用加压过柱法在装柱时就可以有效地解决这个问题， 而且可以使柱子很快装实。
随着科技的发展， 色谱法的技术也日新月异，层析柱， 但柱层析实验技术还是比较简单和实用的， 每个科研工作者在使用柱层析时， 可以根据自己的实际情况来不断地摸索，不断地总结和提高不锈钢层析柱的实验技术。
一般阳离子交换树脂都是氢离子型，这样的话就用1～2%的稀硫酸浸泡，时间12小时或以上，再用水洗至中性，即可使用。不能用自来水洗，层析柱价格，要有去离子水，树脂的ph一般不测定，测的是通过树脂流出来的溶液的ph。
由于在合成树脂过程中，树脂表面及空隙中混掺有低分子和一些无机杂质(如铜、铁等)、高分子单体物质，以及致孔剂等，因此树脂在正式投入运行之前，必须将这些杂质除去，否则在使用过程中会以各种方式污染树脂。特别应当指出，在含铬废水中，因铬酸是一种氧化剂，如树脂中有铜、铁，便有催化氧化作用，从而加快树脂氧化。预处理方法如下：1、热水洗涤准备使用的新树脂先用热水反复清洗。阳树脂可用70～80℃的热水，阴树脂(特别是强碱阴树脂)的耐热性较差，可用50～60℃的热水。开始浸洗时，每隔15分钟左右换水一次，浸洗时要不是搅拌，换水4～5次后，可隔30分钟左右换水一次，总共换水7～8次，浸泡至洗涤水不带褐色，泡沫很少时为止。