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- 发布时间
- 2022-10-23 10:15:50
二、黏附剂的使用
1.多聚左旋赖氨酸(poly-1-lysine)
首先配制0.1%(ω/υ)多聚左旋赖氨酸浓缩液,室温下(18~26℃)可保存1年。使用时,蛋白固化素,将试剂10倍稀释成工作液,浓度为0.01%(ω/υ),2-8℃冰箱保存,有效期3个月。使用方法是将充分洗净和预先干燥的玻片浸泡于稀释后的多聚左旋赖氨酸溶液数十秒或提拉十次,沥干.于室温下晾干12-24小时或在45℃以下烤箱内烘干。处理后的玻片避光干燥可保存三个月。
物理吸附作用是简单粗糙的,下面用一个例子定性地感受一下。有研究者在2005年使用原子力显微镜和中子反射研究了一种抗体(小鼠抗人绒毛膜单抗体)在亲水性二氧化硅和水界面处的取向排列方式,蛋白固化,结果显示:抗体主要以“平躺”的方式排列在界面处,即抗体的Fc和Fab端均与二氧化硅表面接触。在一些地方会形成2-15个抗体分子大小的不均匀团簇,不添加水的对比实验显示抗体在二氧化硅表面会形成更大的团簇。结果表明抗体与亲水表面的作用力很弱,相邻蛋白质之间的疏水引力是导致团簇形成的原因。
共价偶联比物理吸附更先进一些,主要表现在它克服了物理吸附的两个缺点:共价偶联在固体表面的抗体(1)排列取向一定程度上是确定的;(2)不容易脱离到溶液中。赖氨酸、谷氨酸和天冬氨酸等氨基酸经常被作为蛋白质修饰的靶点,其中赖氨酸尤甚(Chem. Sci., 2017,蛋白固化酶,8, 63-77,Chem. Sci., 2018,蛋白固化目的, 9, 79–87),其它氨基酸由于位于蛋白质内部或反应性弱或不可控等原因而很少用于偶联。