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- 发布时间
- 2022-11-09 10:05:33
目前已有多种方法可以将寡核苷酸或短肽固定到固相支持物上。这些方法总体上有两种,即原位合成( in situ synthesis )与合成点样两种。支持物有多种如玻璃片、硅片、聚膜、纤维素膜、尼龙膜等,表面羧基化反应时间,但需经特殊处理。作原位合成的支持物在聚合反应前要先使其表面衍生出羟基或氨基(视所要固定基因芯片的分子为核酸或寡肽而定)并与保护基建立共价连接;作点样用的支持物为使其表面带上正电荷以吸附带负电荷的探针分子,通常需包被以氨基硅烷或多聚赖氨酸等。
现阶段,表面羧基化粒子,因为敏感度限制,大部分方式必须在标识与分析时对样品开展适度的程序增加,但是也有很多人尝试绕开这一难题,如MosaicTechnologies企业引入的固相PCR方式,引物设计非特异强,无而且免去了液相处理繁琐;LynxTherapeutics企业引入大规模的并行处理固相法(Massivelyparallelsolid-phasecloning),可在一个样品中并且对不计其数的DNA精彩片段开展,香港表面羧基化,且不用独立和处理分离出来每一个。
二、黏附剂的使用
1.多聚左旋赖氨酸(poly-1-lysine)
首先配制0.1%(ω/υ)多聚左旋赖氨酸浓缩液,室温下(18~26℃)可保存1年。使用时,将试剂10倍稀释成工作液,羧基化表面处理,浓度为0.01%(ω/υ),2-8℃冰箱保存,有效期3个月。使用方法是将充分洗净和预先干燥的玻片浸泡于稀释后的多聚左旋赖氨酸溶液数十秒或提拉十次,沥干.于室温下晾干12-24小时或在45℃以下烤箱内烘干。处理后的玻片避光干燥可保存三个月。