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我想用hplc分离一个简单的多肽，我应该选用什么样的流动相，还有他的梯度，还有选用什么样的柱子

答： RP-HPLC，C18柱可以制备很少量的肽。如果用RP-HPLC，首先应该用同类型的分析柱子分析一下多肽含多少杂质，设置缓缓的梯度的分离样品，在根据分析柱子跑出的峰形，逐渐放大纯化的方法。

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低压：一般而言，低压适合易分离化合物，但分离时间长很容易造成敏感化合物分解。中压：中压一般采用恒流泵提供恒定的流动相流速，填料颗粒更小，分辨率更高，超级制备色谱仪多少钱，耐受更高压力和更快流速。高压：高压通常在分离制备的后阶段采用，应用于分离困难的样品，纯度甚至能达到99.9%。

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我国是继美国、日本之后早开展逆流色谱应用的国家，俄罗斯、法国、英国、瑞士等国也都开展了此项研究。美国 FDA 及世界卫生组织（ WHO ）都引用此项技术作为成分的分离检定， 90 年代以来，高速逆流色谱被广泛地应用于天然成分的分离制备和分析检定中。中压制备色谱是一般由泵提供压力，压力在5~20bar。中低压色谱柱与常压柱、HPLC柱有比较大的不同：在使用是是封闭的，但是可以比较方便的打开与调节长度，这与中低压色谱常常固体上样相适应的。中低压制备色谱柱的材质主要有塑料柱、玻璃柱、不锈钢柱三种。

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