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- 苏州贝蒂克生物技术有限公司
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- 发布时间
- 2022-11-17 04:10:25
2.大规模基因心片
大规模基因芯片通常涉及基因组规模与数量(一般大于10000个基因),分别采用接触式点样、非接触式点样或者半导体技术制备样品。接触式点样方法包括点样元件或点样元件中的液体和芯片基片间有直接接触的各种方法。非接触式芯片制备方法包括各种芯片制备中不需点样元件和芯片基片间直接接触的各种技术,其样头的是以可控的方式从喷嘴中喷出小体积的液滴。半导体制备技术指借鉴计算机芯片制造业中的微型化加工方法的基因芯片制备技术。基因芯片的工作流程如下:
(1) 经大规模PCR扩增获得独立cDNVA插入片段。
(2)用机械手将 PCR产物点在玻璃板上,变性、固定。
(3)分 别从不同或组织中分离mRNA.反转录生成cDNA.
(4)用 不同的荧光染料标记不同或组织的cDNA。
(5)将标记好的 cDNA与点好的芯片进行杂交。
(6)激光扫描芯片杂交结果, 计算机处理。
(7)分 析杂交数据。
以合成寡核苷酸探针为例,该技术主要步骤为:首先使支持物羟基化,并用光敏保护基团将其保护起来。每次选取择适当的蔽光膜( mask )使需要聚合的部位透光,其它部们不透光。这样,光通过蔽光膜照射到支持物上,受光部位的羟基解保护。因为合成所用的单体分子一端按传统固相合成方法活化,epoxysilane产家,另一端受光敏保护基的保护,epoxysilane的原理,所以发生偶联的部位反应后仍旧带有光敏保护基团。因此,每次通过控制蔽光膜的图案(透光与不透光)决定哪些区域应被活化,以及所用单体的种类和反应次序就可以实现在待定位点合成大量预定序列寡聚体的目的。
按照芯片上的探针对微阵列芯片进行分类,有核酸芯片、蛋白质芯片和组织芯片等,目前应用泛的是核酸芯片,核酸芯片又有两种类型,分别是cDNA微阵列和寡核苷酸微阵列。
cDNA基因文库由PCR产物组成,为双链结构,长度一般在数百至数千碱基对,因而芯片的杂交条件对每个基因不能保证是的,假阳性率较高,因此,epoxysilane,判定cDNA微阵列的终结果时,有必要对筛选出的基因进行测序。在应用cDNA微阵列进行研究时,一般需要提供一个对照样本,将其与需要研究的标本给予不同的标记,将二者灯亮混合后共同注入芯片进行孵育。扫描后得到的原始数据是各个单元格中信号强度的比率。