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工业制备色谱

现代生物技术的迅速发展及其产业化对其下游过程，高压制备色谱系统批发价格，即生物技术产品(尤其是各种蛋白质)的分离纯化技术提出了迫切的需求。通过发酵和动、植物细胞培养等生成的目标产物需通过一系列的分离和纯化等步骤才能获得终的产品。通常，生物技术产品生产中分离提纯成本要占其生产总成本的40%~90%。在以小分子产品为主的传统发酵工业中分离成本要占总成本的60%左右，而以蛋白质为代表的现代基因工程产品则有时可高达90%左右。作为生物工程的一个组成部分，分离技术在其产品实现中起到重要作用。

如何用制备色谱柱制备低含量的杂质？

制备色谱柱为ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson馏分收集器，色谱仪为Agilent1100或LC-6A。想用其制备面积归一化法含量为0.05%左右的杂质，初步提纯后用高分辨的LC-MS进行定性分析。如何设定色谱条件，如，流量、进样量、样品的浓度、切割点的设置、是否要浓缩，高压制备色谱系统，要求将95%以上的主峰切除。

（主峰后有二个杂质靠得很近。）

答：

1.制备用的流动相尽量等级高一点，否则流动相中的杂质会影响LC-MS分析。

2.使用馏分收集器时，延迟体积一定要计算准确，检测器的响应时间设到很小，高压制备色谱系统哪家质量好，否则都会影响收集的纯度和回收率。制备柱的流速一般与直径的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速为1mL/min，9.4mm制备柱用1*（9.4/4.6）2，大约为4mL/min。进样量设到几个mg应该基本没有过载。进样样品浓度越高越好。假如进样10mg，理论计算0.05%的杂质大约只有5μg，显然浓度太低，高压制备色谱系统哪个牌子好，尽量是多做几次，合并馏分然后浓缩后做LC-MS分析。

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产品纯化收率：纯化得到的目标物与初始样品中目标物的比值

合成反应中的收率主要由反应的复杂程度即得到目标产物的难易程度来决定，若想得到佳的产品收率，必须首先得到目标物的佳反应条件，筛选条件的过程需要很高的理论水平以及很长时间的实验研究。得到佳反应条件后，再以合适的分离纯化手段才可能得到佳纯化效果，即色谱制备纯化的收率主要取决于实际分离的效果。

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