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- 2022-12-19 16:29:51
高效液相色谱法实验结果分析
现代色谱分析法是有效而快速的分离、分析手段,既可用于定性分析,又可用于定量分析。高效液相色谱法与气相色谱法的定性分析和定量分析方法(包括测定方式和计算方法)相同。在定性分析中,有用纯物质对照的色谱鉴定法,高效液相色谱,还有收集馏分与化学方法或其他仪器分析方法联用的非色谱鉴定法;在定量分析中,可以用峰高或峰面积以内标法、外标法或归一化法定量,并与微机联用作为现代化的分析工具。
定性分析
色谱分析法定性分析的目的就是确定每个色谱峰代表什么组分,从而确定由这些组分所构成的混合物试样的组成。常用的主要定性方法有色谱鉴定法和非色谱鉴定法两种。
1.色谱鉴定法定性
色谱鉴定法就是用纯物质对照定性,这是气相和高效液相色谱法中常用的方便的一种定性方法,可以和定量测定操作同时进行。
(1)利用保留值定性
在色谱条件一定的情况下(包括柱长、柱内径、固定相、柱温、流动相及流速等),每一种物质都有其一定的保留值(包括保留时间、保留体积、调整保留时间、调整保留体积等),一般不受其他组分的影响,可以作为定性的根据。此法又称为纯物质对照定性。
在相同的色谱条件下,先测定未知物中每个色谱峰的保留时间或保留距离,再将要测的某纯物质注入色谱仪,对照比较两者的保留值,如果两者的保留值相同,就可判定该未知物与已知纯物质是同一种物质。
(2)利用加入纯物质增加峰高法定性
在稳定的色谱条件下,为了区分两个保留值(保留时间或保留距离)非常接近的组分,可以将某纯物质直接加入到试样中,再注入色谱仪,如果某组分峰的峰高增加了,表明这个色谱峰就是加入的纯物质。此法又称为纯物质追加法定性。
色谱鉴定法定性需要有纯物质对照,在没有纯物质时,可以用非色谱鉴定法定性。
UPLC和HPLC的区别
与传统的高效液相色谱(HPLC)相比,UPLC具有高分离度(ultra resolution)、高速度(ultra speed)、高灵敏度(sensitivity)等优势。在全方面提升HPLC的速度、灵敏度和分离度诸品质的同时,保留其原有的实用性及原理。
其显著的优势是可以缩短分析时间,高效液相色谱费用,提高工作效率。
使用UPLC确实能明显缩短分析时间,高效液相色谱报价,提高了效率(如某有关物质分析方法,使用HPLC运行一针是75分钟,UPLC完全可以在10分钟内搞定),分析效率提高将近7.5倍。
当然了,分析效率提高这么多,其配套设备肯定也不是闹着玩的。UPLC需要小颗粒杂化填料(1.7um)的色谱柱、更高耐压(达15000Psi)、低系统体积的输液单元。
关于色谱柱的使用和维护
色谱柱的正确使用和维护十分重要,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中,需要注意下列问题,以维护色谱柱。
调节流速太快。。。
避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料,因此在调节流速时应该缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓(如前所述)。
反冲色谱柱。。。
一般说来色谱柱不能反冲,高效液相色谱哪个稳定性好,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。
预柱和保护柱。。。
选择使用适宜的流动相(尤其是pH),以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱,分析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”,避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内,需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。