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- 2023-04-06 01:10:09
液相色谱
HPLC对流动相的一般要求
流动相就比如人体的血液,其质量直接影响到整个系统的正常运行与否。
应该使用HPLC级的溶剂,不能互相混溶的溶剂不可以直接切换!一般在水相和与其不混溶的溶剂切换时,使用异作为过渡溶剂。
注意溶剂的截止波长。截止波长是指该溶剂可以在紫外检测器中使用的低波长,低于该波长后,昭和阳离子分析柱多少钱,溶剂会有很强的紫外吸收,从而影响极限的稳定性、干扰对所分析物质的检测。
HPLC所使用的水必须是新鲜的和经过0.45μm滤膜过滤过的。建议每天更换新鲜的水。长期不用时,必须把使用水的管路用置换,防止长霉。
仪器使用完后要采用适当的溶剂冲洗等方法维护色谱柱和系统。如果使用了缓冲盐一定先将盐要冲洗干净。
仪器长期不用时,不建议使用纯封存。因为有生成聚合物的趋势。建议使用、/水或/水封存。
当有流路堵塞时,可以尝试将之反接后冲洗。污染的溶剂或溶剂瓶里的藻类生长将会缩短溶剂过滤器的使用寿命,并且影响泵和系统的的性能。这在水溶剂或磷酸盐缓冲液(pH 4 至7) 中尤其如此。
为什么液相色谱适合分析低沸点化学物质?
这个说法不能理解成液相色谱不适合分析高沸点物质。
其实这是因为气相色谱一般需要对物质进行加热,然后根据汽化温度(沸点)不同,物质先后进入检测器。检测器一般是氢火焰检测器为主。
如果一个物质沸点太低,那么很容易出峰非常快,和溶剂出在一起,在谱图前端,根本看不出来(如果你看过气相色谱图你就知道了)。
此时就需要用HPLC,昭和阳离子分析柱,因为HPLC分开物质依据的是物质和色谱柱填料的亲和力强弱,而不是沸点。
举个例子,如果我想要知道我一个样本中是否含有(沸点85℃),用气相色谱是非常困难的。因为沸点100℃以下的物质在GC里面出峰是极度困难的。
但是我如果用HPLC配合反相柱,此时就可以看得出来。
多说一点,实际上还有一些情况我不能用HPLC来分析,阳离子分析柱,就是当一个化合物极性非常大或者极性非常小,此时我无论用正相色谱柱还是反相色谱柱,都会有一个问题,就是我的化合物要么出在前面和溶剂在一起,要么根本出不出来。
比如咪唑,咪唑的亲水性太强,我经常在HPLC反相柱里面分离不开,此时一般我要分析,就会借助GC(沸点256℃)
液相色谱仪常见故障解决方案
如何排除液相色谱仪气泡溢出的故障?
流动相内产生都无法清除不断产生的气泡,主要是因为过滤器长期沉浸于铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,阳离子分析柱价格,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%溶液中12~36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0~3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯冲洗半小时即可。