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- 2023-04-07 11:31:02
荧光分光光度计
荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器。其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数，从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定，不但可以做一般的定量分析。 荧光光谱法具有灵敏度高、选择性强、用样量少、方法简便、工作曲线线形范围宽等优点，可以广泛应用于生命科学、医学、药学和药理学、有机和无机化学等领域。
荧光光谱定量分析
在低浓度时，溶液的荧光强度与荧光物质的浓度成正比：F=Kc。其中，F为荧光强度，c为荧光物质浓度，K为比例系数。这就是荧光光谱定量分析的依据。
上述关系不适用于荧光物质浓度过高时，荧光物质浓度过高，其荧光强度反而降低。原因有：
（1）内滤效应。一是，当溶液浓度过高时，爱丁堡荧光光谱代理商，溶液中杂质对入射光的吸收作用增大，相当于降低了激发光的强度。二是，浓度过高时，入射光被液池前部的荧光物质强烈吸收，处于液池中、后部的荧光物质，则因受到入射光大大减弱而使荧光强度大大降低；而仪器的探测窗口通常对准液池中部，从而导致检测到的荧光强度大大降低。
（2）相互作用。较高浓度溶液中，可发生溶质间的相互作用，产生荧光物质的激发态分子与其基态分子的二聚物或其他溶质分子的复合物，从而导致荧光光谱的改变和/或荧光强度下降。当浓度更大时，甚至会形成荧光物质的基态分子聚集体，导致荧光强度更严重下降。
（3）自淬灭。荧光物质的发射光谱与其吸收光谱呈现重叠，便可能发生所发射的荧光被部分再吸收的现象，唐山爱丁堡荧光光谱，导致荧光强度下降。溶液浓度增大时会促使再吸收现象加剧。
当然，爱丁堡荧光光谱代理，荧光强度的影响因素还有溶剂、温度、pH值、散射光等，在定量分析中需要加以考虑。
荧光光谱定量分析的计算与其他光谱类似，爱丁堡荧光光谱价格，包括标准曲线法、比例法等。
荧光分光光度计测试注意事项
①样品应盛在四面透光的石英比色皿（荧光池）中，如果是挥发性样品应使用带塞的荧光池。
②在荧光分析时，为了得到稳定且可靠的数据，一般需要开机预热氙灯大约30min。如果仪器光源采用的是闪烁氙灯，预热时间可以缩短到10min左右。对某些易感光、易分解的荧光物质，尽量采用长波长、低人射光强度及短时间光照。
③温度变化可引起荧光强度的改变。通常降低温度，有利于提高荧光量的子产率，荧光强度增大。温度影响荧光强度的显著程度因样品而异，大部分荧光物质的荧光强度受温度影响不大，测试温度变化不超过±3℃，对测试结果几乎无影响。
④当荧光物质是弱酸或弱碱时，溶液的pH对荧光强度有较大影响。因为弱酸或弱碱在不同酸度中，分子和离子的电离平衡会发生改变，而荧光物质的荧光强度会因其离解状态发生改变。
⑤分子结构中存在π-π共轭的荧光物质在极性溶剂中，荧光效率显著增强。溶液中表面活性剂的加入能够显著提高荧光强度。
⑥瑞利散射和拉曼散射是溶剂的两种散射光，应注意不要误把瑞利散射和拉曼散射光谱当做荧光光谱。瑞利散射光波长与激发光波长相同，拉曼散射与激发光波长不同，而荧光物质的荧光波长与激发光波长无关，因此可以通过选择适当的激发波长将拉曼散射光与荧光分开。在测试时选择合适的狭缝宽度，或者空白扣除，也可以对散射光的影响进行校正。
⑦荧光物质分子与溶液中其它物质分子之间作用导致荧光强度降低，常见的荧光猝灭剂，如卤素离子、重金属离子、硝基化物质、重氮化合物等。
⑧测试过程中注意不要肉眼盯着氙灯光源看，以防眼睛造成损伤。
⑨仪器房应注意经常通风，避免产生的臭氧在室内富集。