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- 发布时间
- 2023-05-13 13:50:00
一文了解亲和层析柱装柱注意事项
(1)非特异性洗脱
非特异性洗脱是指通过改变洗脱缓冲液pH、离子强度、温度等条件,降低待分离物质与配体的亲和力而将待分离物质洗脱下来。
当待分离物质与配体亲和力较小时,一般通过连续大体积平衡缓冲液冲洗,就可以在杂质之后将待分离物质洗脱下来,这种洗脱方式简单、条件温和,不会影响待分离物质的活性。但洗脱体积一般比较大,得到的待分离物质浓度较低。
当待分离物质和配体结合较强时,大孔树脂柱价格,可以通过选择适当的pH、离子强度等条件降低待分离物质与配体的亲和力,具体的条件需要在实验中摸索。可以选择梯度洗脱方式,这样可能将亲和力不同的物质分开。如果希望得到较高浓度的待分离物质,可以选择酸性或碱性洗脱液,或较高的离子强度一次快速洗脱,这样在较小的洗脱体积内就能将待分离物质洗脱出来。
但选择洗脱液的pH、离子强度时应注意尽量不影响待分离物质的活性,大孔树脂柱供应,而且洗脱后应注意中和酸碱,透析去除离子,以免待分离物质丧失活性。对于待分离物质与配体结合非常牢固时,可以使用较强的酸、碱或在洗脱液中加入脲、胍等变性剂使蛋白质等待分离物质变性,而从配体上解离出来。然后再通过适当的方法使待分离物质恢复活性。
平衡柱子
即用洗脱剂中极性小的溶剂(例如、、等)用计量泵(或氮气)打入(压入)层析柱上端。此溶剂因极性小于硅胶,不会把吸附在硅胶上端面的物料中有用物质洗脱下来,而只能将物料中的极性很小的油脂等杂质洗下。另外,此过程还可以将柱中硅胶中的大量空气往下赶出柱外。这个过程俗称“平衡”柱子或“平衡”吸附剂。可使硅胶被溶剂浸润,且排出空气,有利于续后的洗脱分离过程。
当平衡用的溶剂从柱下流出后,可以停止此过程,改用洗脱剂洗脱分离过程;平衡过程也可以再理行一段时间,将柱子中的空气多排出一些,但溶剂耗量也会增加。
如遇停运期间恰为冬季或环境温度较低,为了防止树脂储存期间冻结,对树脂进行充分再生处理与水洗后,应用盐水进行过柱浸泡,对树脂床层与树脂内部进行盐水置换保存,大孔树脂柱生产厂家,后期恢复运行之前,沧州大孔树脂柱,再用洁净的去离子水进行清洗置换。
盐水(或碱盐水)浸泡防止染菌
树脂长时间储存在树脂柱中存在藻类、细菌等微生物滋生的风险,为了有效抑制该问题的发生,可对树脂进行充分再生与清洗(使树脂保持清洁状态)后,用10%的NaCl盐水或10%的NaCl 2%的NaOH碱盐水过柱浸泡置换处理后,将树脂保存在相应的盐水或碱盐水中,可有效抑菌。