结合疫苗载体蛋白等电点测定

结合疫苗载体蛋白等电点测定--检测技术服务详情

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结合疫苗，又称为偶联疫苗，如肺炎链球菌疫苗，是一类特殊的疫苗。结合疫苗的工作原理是将小分子抗原（通常是多糖）结合在大分子载体蛋白上，而这种载体蛋白通常能够引发强烈的免疫反应。接种结合疫苗不仅能产生大量抗体，再次接种时，会对之前的剂次产生加强作用，从而导致产生抗体的速度更快、浓度更高、保护作用更强。结合疫苗目前已广泛应用于医学上，如儿童免疫、流感疫苗及HPV疫苗等等。电荷异质性是结合疫苗载体蛋白的关键属性，对疫苗的稳定性、溶解性、体内体外的生物学活性以及药物的动力学功能发挥均具有重要的影响。结合疫苗载体蛋白的电荷异质性表征首当其冲就是等电点的测定。

等电点是指在一个分子不携带净电荷或在统计平均值上呈电中性时的pH值。jīng确测定等电点是结合疫苗载体蛋白鉴定的一个有效手段，因为特定蛋白质的等电点是固定的，这与该蛋白的构象相关。此外，蛋白质等电点也是许多常见生化分析、蛋白组学实验中的一项重要指标，例如双向凝胶电泳（2D-PAGE）、液质联用等实验。

常用的结合疫苗载体蛋白等电点测定方法主要有：沉淀法、分光光度法和等电聚焦法等，基于毛细管电泳的等电聚焦法凭借其耗时短、jīng确度高以及样本用量少等优点已成为等电点测定的强有力工具。毛细管等电聚焦法利用蛋白质在等电点时净电荷为零的原理将待测蛋白质在特殊的缓冲液中进行聚丙烯凝胶电泳，这种特殊的缓冲液为两性电解质，可以在凝胶内形成连续的pH梯度，当电泳完毕时，蛋白质迁移到的位置对应的pH就是该蛋白质的等电点。

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