BIFC 贝科新肽

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2023-12-13 10:04:13
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为什么要提供GFP空载的对照图片?

(1)作为整个实验过程中的操作参照,可排除因实验操作而导致目的基因没有荧光信号的影响。

(2)作为载体体系的参照,确认构建载体时所使用的载体是可正常表达荧光蛋白的。

拍摄时为什么有明场通道?

(1)显示细胞状态,BIFC,有活力的细胞应该有正确且明显的细胞形态,变形或破碎的细胞说明此时细胞不是适状态或细胞已。

(2)显示荧光确实是细胞内蛋白表达的,而不是细胞碎片及杂质产生的杂光。





蛋白亚细胞定位是指对蛋白质在细胞内的具体位置进行分析和预测,对于理解蛋白质的功能和作用机制具有重要意义。随着生物信息学和蛋白质组学的发展,越来越多的研究机构和实验室开始提供蛋白亚细胞定位的分析和预测服务。

蛋白亚细胞定位的方法通常分为基于实验的方法和基于计算的方法。基于实验的方法通常使用荧光、荧光共振能量转移等技术来观察蛋白质在细胞内的位置,但是这种方法需要耗费时间和人力,且实验结果可能受到多种因素的影响。基于计算的方法则利用已知的蛋白质序列和数据库中的信息来预测蛋白质的位置,这种方法具有快速、、可重复性高等优点,但是预测结果的准确性可能会受到数据质量和模型准确性的影响。




为什么不先对一个基因做预测,在预测的结果上直接做共定位?

不同的预测网站有不同的计算方法,同一个基因在不同的预测网站也可能得出不同的定位结果。另外所有的结果都应是基于实验得到的,对于不清楚可能定位在哪里的基因,一般推荐先做普通定位,根据普通定位的结果再决定做哪种细胞器的共定位。

为什么有的基因做原生质体转化时荧光蛋白不亮?

不同物种的细胞可能对基因表达有影响,当在一种材料的原生质体中观察不到荧光时,可以考虑换一种受体材料。另外,如果是分泌蛋白,在原生质体中无法观察到荧光,此时可以考虑注射叶片来观察荧光。

拍摄时为什么有明场通道?

(1)显示细胞状态,有活力的原生质体细胞应该是饱满圆润的,变形或破碎的细胞说明此时细胞不是适状态或细胞已。

(2)显示荧光确实是细胞内蛋白表达的,而不是细胞碎片及杂质产生的杂光。


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