抑菌环试验，消毒技术规范（卫生部 2002年版）第二部分（2.1.8.2）-方检检测

抑菌环试验是一种常用的生物学实验方法，主要用于评估物质的抑菌效果。其原理是利用抑菌剂在琼脂培养基中不断溶解扩散，形成不同浓度的抑菌剂梯度，通过观察抑菌环的大小来判断物质的抑菌能力。这种试验方法适用于抑菌剂与溶出性抗（抑）菌产品的鉴定。

以下是抑菌环试验的一般步骤：

准备菌悬液和培养基：挑取菌种于带玻璃珠的无菌水中，振荡使孢子分散，过滤后制成混合孢子悬液。向培养皿中注入一定量的混合孢子悬浮液和熔化状琼脂培养基，混合均匀，待其冷却。

制备抑菌剂样片：将抑菌剂溶液滴加到滤纸片上，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内，置温箱中烤干备用。

接种试验菌：用无菌棉拭子蘸取试验菌悬液，在营养琼脂培养基平板表面均匀涂抹3次。每涂抹1次，平板应转动60°，最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。盖好平皿，置室温干燥5min。

贴放抑菌剂样片：用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距25mm以上，与平板的周缘相距15mm以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面。

培养观察：盖好玻璃皿，置于恒温箱中培养一定时间（通常为24h）。然后观察抑菌环的形成情况，用游标卡尺测量抑菌环的直径并记录。试验重复3次。

需要注意的是，所有的操作用具和材料都要事先进行灭菌处理，操作必须在无菌室（或无菌箱）内于火焰旁进行。此外，混合菌液的浓度、倒入培养皿的琼脂培养基温度、培养时间等因素都可能影响试验结果，因此需要严格控制实验条件。

通过抑菌环试验，可以初步评估物质的抑菌效果，为进一步研究和应用提供参考依据。