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名称：活性氧检测试剂盒
货号：CA1410
规格：100-500T
产品内容：
A 液 DCFH-DA（10 mM） 0.1 ml −20 ºC 保存
B 液 活性氧阳性对照（Rosup, 50mg/mL ） 1 ml −20 ºC 保存
说明书 1 份
产品简介：
活性氧检测试剂盒（Reactive Oxygen Species Assay Kit）是一种利用荧光探针 DCFH-DA 进行活性氧检测
的试剂盒。DCFH-DA 本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成
DCFH。而 DCFH 不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的
DCFH 生成有荧光的DCF 。检测DCF 的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。
本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup，以便于活性氧的检测。Rosup 是一种混合物，浓度为
50mg/mL 。
活性氧检测试剂盒本底低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。
本试剂盒可以测定100～500 个样品。
操作步骤：
一、装载探针：
对于刺激时间较短（通常为2 小时以内）的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药
物刺激细胞。对于细胞刺激时间较长（通常为6 小时以上）的细胞，先用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药
物刺激细胞，后装载探针。
原位装载探针：本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1 ∶1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓
度为10μ mol/L。去除细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，
通常对于六孔板的一个孔加入稀释好的DCFH-DA 不少于1mL 。37℃细胞培养箱内孵育20 分钟。用无血清
细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20～30
分钟后可以显著提高活性氧水平。
收集细胞后装载探针：按照1 ∶1000 用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10μmol/L。细胞收集
后悬浮于稀释好的DCFH-DA 中，细胞浓度为一百万至二千万/mL ，37℃细胞培养箱内孵育20 分钟。每隔3 ～
5 分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞
内的DCFH-DA。直接用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞，或把细胞等分成若干份后刺激细胞。
通常活性氧阳性对照在刺激细胞20～30 分钟后可以显著提高活性氧水平。
说明：仅在阳性对照孔中加入Rosup 作为阳性对照，其余孔不必加入Rosup。
二、检测：
Solarbio
Beijing Solarbio Scie