核酸检测PCR实验室气溶胶污染预防过氧化氢消毒机

        核酸检测实验是微观的，基于细胞，分子，蛋白水平，而这些微观样本对外界环境的影响敏感，比如温度、ph值、酶解、损伤等，在我们尽力呵护样本的生存环境的同时，污染也是需要注意的头等大事，要坚决避免环境中的“杂质”的乱入，包括样本污染，试剂仪器交叉污染、产物气溶胶污染等对实验结果的影响。“易查不易察”，污染来的悄无声息，防不胜防，假阳性结果让无数核酸检测人员抓狂和崩溃。

一旦出现实验室环境污染，比如样本之间交叉污染、试剂污染、仪器污染、阳性对照污染、PCR扩增产物污染、气溶胶污染等，其中气溶胶污染是一个非常重要而被忽视的污染源。实验室出现气溶胶污染，需要较长的时间进行根除。

 

一、气溶胶污染原因

1、样本之间交叉污染。

标本污染主要有收集标本的容器被污染；标本存放运输时，由于密封不严或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；核酸模板在提取过程中，由于加样枪污染导致标本间污染；手动提取核酸样本时，污染的手套触摸离心管内盖导致的污染；有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。

2、PCR试剂污染

PCR试剂在配制过程中，移液枪、枪头、离心管等原因造成试剂被PCR核酸模板污染。

3、不同工作区域移液枪等耗材交叉使用。

 将易污染区域的移液枪、枪头、离心管等耗材拿到洁净区使用引起的污染；

4、离心机转子未定期擦拭。

离心机通常进行各种试剂组分、不同盲样的离心，如果离心管外部沾染病毒、阳性核酸或阳性质粒，容易造成污染。

5、阳性对照造成的污染。

开盖时间过长高浓度质粒挥发到室内，阳性对照组分未使用完任意丢弃，加完阳性对照的枪头未放入消毒液中。

6、扩增产物开盖造成的污染。

这是PCR试验中最主要、最常见的污染原因。因为PCR产物拷贝量大，远远高于PCR检测拷贝的极限，PCR产物开盖后，极易迅速造成扩散，极微量的PCR产物污染，就可形成假阳性。

7、各个实验室擦桌布、扫把，簸箕，工作服交叉使用。

 

二、核酸检测实验室如何预防污染

1、合理的实验分区

原则上可以设置3个独立的工作区域：

试剂耗材储存与准备区、标本处理和标本准备区（核酸纯化）、扩增检测区，各区域空间完全相互独立，不能直接相通。其中试剂耗材储存与准备区必须独立设置。

实验室实施空气流向控制，扩增前和扩增后区域应具有独立通风系统，扩增后区域保持负压状态，其它区域保持正压状态，防止扩增产物进入扩增前的区域。

 

2、实验操作流程：

（1）样品制备区进行样品处理，核酸提取；

（2）配液区配置反应体系：酶混合液和PCR反应液混合，分装至PCR反应管；

（3）样品制备区加样：样品核酸和阴阳性对照加至反应液中；

（4）PCR扩增区上机扩增检测。务必保持单向操作流程，避免各区实验室污染。

3、各个实验区内试验用品专区专用

配液区是最洁净的试验区域，样品制备区的洁净度稍差， PCR扩增区内是最易被污染的区域，各区之间试验物品专区专用，避免因交叉使用造成实验室污染。

4、试验操作要规范

    （1）正确使用移液枪，保证试剂配比和计量正确，同时避免液体吸入移液枪口造成污染。

    （2）实验的过程中应勤换手套，在进出不同区域或进行模板操作后，都应及时更换手套。

    （3）试剂盒各组分在打开之前应先做瞬时离心(约10s)，将管壁及管盖上的液体甩至管底部，从而减少污染手套或加样器的机会。开管动作要轻，以防管内液体溅出或形成气溶胶，造成污染。

    （4）样本量较多时，应将反应液预混，再分装至PCR反应管，最后添加核酸模板，以减少单个添加操作繁琐造成的污染。

    （5）每次试验必须设定阴性对照和阳性对照，读取结果时，在保证阴阳性对照均成立的情况下，判读样本结果才有效。

    （6）实验结束后，PCR反应管严禁打开，及时放置杀孢子剂消毒液中浸泡。

 

三、解决核酸实验室污染方法

    （1）开窗通风：如在短时间内要消除实验室污染，开窗通风促进实验室内空气流通，使停留在室内的核酸排放到室外。

    （2）紫外灯照射：将实验室内好生物安全柜内物品平铺，打开离心机内盖，然后将紫外等打开照射12-24小时，通风12小时以上。

    （3）消毒液降解核酸：及时用诺福过氧化氢杀孢子剂擦拭操作台面和仪器，按照1:10稀释浸泡试验器具，同时按照1:3比例稀释涮洗拖布擦拭地面。

    （4）高压：试验耗材、工作衣等进行121℃30分钟高压。

    （5）使用商品化核酸去除剂喷洒室内降解核酸。

    （6）阳性污染特别严重，可以采取干雾过氧化氢消毒熏蒸实验室。

 四、法国欧菲姆过氧化氢消毒机专管PCR实验室核酸污染问题
        便携式自动欧菲姆干雾过氧化氢消毒器，能够全面去除污染，包括核酸污染和微生物污染，避免了繁琐的擦拭和不安全的人工喷洒消毒，节省了时间，提高实验效率。

此款PCR实验室过氧化氢消毒器具有以下一些优点：

1）有效彻底控制核酸污染，特别是核酸气溶胶污染；

2）高效杀灭病原微生物200多种，包括新冠病毒；

3）可简单用于放舱实验室，移动检测车等；

4）作用时间短，安全无残留，不影响实验；

5）使用灵活便捷，操作简单易懂，支持无线或远程控制；

 

欧菲姆过氧化氢消毒机解决方案构成：

干雾消毒器+过氧化氢杀孢子剂（高纯低浓度）

液态杀孢子剂通过法国干雾消毒器变成气雾状态极微小颗粒喷出，高速极微小颗粒与空气接触后充分气化，变成气态过氧化氢即为“干雾”。气态过氧化氢具备良好的扩散性、核酸清除及微生物杀灭效果。在氧化和活性银离子的作用下，能迅速与核酸气溶胶黏着并分解清除。

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