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- 2021-04-19 00:11:00
DNA限制性内切酶酶切是一项基于DNA限制性内切酶的基因工程技术,其基本原理是利用限制性内切酶对DNA上特定序列的识别,来确定切割位点并实现切割,从而获得所需的特定序列。
生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶,即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力,但对自己的DNA却无损害作用,这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的,故名限制性内切酶(简称限制酶)。
限制性酶切分析法
限制性酶切分析法是指基因组或一段核酸用限制性内切酶消化产生的片段经电泳等方法分离形成特别的条带图谱,对DNA序列的特征进行的分析。限制性酶是生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。它是可以将外来的DNA切断的酶,即能够限制异源DNA的侵入并使之失去活力,但对自己的DNA却无损害作用。
限制酶是基因工程中所用的重要切割工具。科学家已从原核生物中分离出了许多种限制酶,并且已经商品化,在基因工程中广泛使用。根据限制酶切割的特点,可将它们分为两大类:一类是切割部位无特异性的;另一类是可特异性地识别核苷酸序列,即只能在一定的DNA序列上进行切割。
人工酶与限制酶的区别是什么?
生物体内的天然酶都是由几百个氨基酸分子组成的蛋白质。酶所以有那么强的催化作用,限制酶,跟它特有的结构有关。酶有一个活化中心,即它的催化基因。在化学反应中,催化基因处在两个底物小分子中间,把两个小分子紧紧地拉在周围,使它们结合起来。这就好比一个大人的两只手拉住两个小孩使他们亲近。酶的这种作用能大大加速生物化学反应。
在细菌内存在的一类能识别并水解外源DNA限制性内切酶,它具有很好的专一性,能识别DNA上的特定位点,将DNA的两条链都切断,形成黏性末端或平末端。DNA经限制酶切割后产生的具有碱基互补单链的末端称为黏性末端。限制酶的生物学功能在于降解外面侵入的DNA而不降解自身细胞中的DNA,因自身DNA的酶切位点经修饰酶的甲1基化修饰而受到保护。限制酶较为稳定,常用的约100多种并已转化为商品。限制酶在分析染色体结构、制作DNA的限制酶图谱、测定较长DNA序列以及基因的分离、基因的体外重组等研究中是不可缺少的重要工具酶。