葡萄糖酸氯己定的检测方法主要包括含量测定和鉴别检查。
含量测定一般采用分光光度法。首先，精密量取葡萄糖酸氯己定溶液适量，加水使溶解，并加乙醇定量稀释，摇匀。然后，照紫外-可见分光光度法，在259nm波长处测定吸光度。按照C22H30Cl2N10·2C6H12O7的吸收系数（E1% 1cm）为413计算，即可得到葡萄糖酸氯己定的含量。
鉴别检查则包括观察颜色变化等方法。例如，取葡萄糖酸氯己定溶液2ml，加入加热的1%溴化十六烷基三甲铵溶液5ml，再加入溴试液与氢氧化钠试液各1ml，溶液应显深红色。此外，还可以取溶液2ml，加水2ml与硫酸铜试液5滴，应生成沉淀，煮沸使沉淀凝聚，显淡紫色。或者取溶液2ml，加水2ml与三氯化铁试液0.5ml，缓缓加热至沸，应显橙红色，加盐酸1ml，变成黄色。