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- 武汉纽斯特生物技术有限公司
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- 发布时间
- 2022-11-02 01:16:05
本试剂盒所有组分在有效期限内,于4℃稳定保存。为了长效的实验,1000×储液请保存于-80℃。本试剂盒未提供的必需试剂
1. 去离子水或蒸馏水。
2. 浓盐酸。
3. 量程在5μL至1000μL之间的精密移液管。
4. 量程为50μL和200μL的中继移液器。
5. 用于稀释储液的一次性烧杯。
6. 刻度量筒。
7. 微孔板振荡器。
8. 吸水纸。
9. 酶标l仪,可读波长450nm,在570nm至590nm之间应有修正。
使用前将各种试剂取出放置30分钟,平衡至室温。所有标准品和样品必需设置平行对照实验。
快速加入试剂至样品中,立即漩涡震荡2秒混匀。
1. 依据实验键盘纸决定酶标条的使用量,将剩余的酶标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋,密封,4℃保存。
2. 移取50μL中和液至各个微孔中,除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。
3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔和B0孔(0 pmol/mL cAMP标准品)。
4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。
5. 移取100μL样品至相应的孔。
6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔。7. 移取50μL 偶联酶至各孔中,除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。
8. 移取50μL 抗l体工作液至各孔中,除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特异结合)孔。
9. 将酶标孔置于孔板振动器上,250~500rpm,室温孵育2小时。
10. 在吸水纸上拍干微孔内溶液,加洗涤液400μL每孔洗3次,每次需拍干。
11. 后一次洗涤,清空各微孔,在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次,以确保没有洗涤液残留。
12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。
13. 每孔200μL显色底物溶液,于室温静置5~30分钟。(显色底物A和B需在临用前15分钟内等体积混合,并避光放置。)
14. 每孔加入50μL终止液。终止后立即读数。
15. 清除酶标l仪Blank(空白)孔值,读取450nm处的光密度值,在570nm至590nm之间有修正。如果酶标l仪不能自动清除Blank(空白)孔值,那么手动扣除每个读数的Blank(空白)孔光密度值。