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- 发布时间
- 2022-11-16 10:07:01
将芯片与待研究的cDNA或其他样品杂交,硅片表面氨基修饰,经过计算机扫描和数据处理,便可以观察到成千上万个基因在不同组织或同-组织不同发育时期或不同生理条件下的表达调控情况。荧光标记的cDNA与芯片上相匹配的DNA序列发生杂交反应,是的芯片上的点呈现出荧光信号,荧光信号的强度和基因表达的多度呈正相关。基因芯片这种微型化装置具有巨大的容量,是科学家在单次试验中就可以分析整个基因组的变化。
主要原因是,合成反应每步产率比较低,不到 95% 。而通常固相合成反应每步的产率在 99% 以上。因此,探针的长度受到了限制。而且由于每步去保护不很,江苏表面氨基修饰,致使杂交信号比较模糊,信噪比降低。为此有人将光引导合成技术与半异体工业所用的光敏抗蚀技术相结合,以酸作为去保护剂,ITO玻璃表面氨基修饰,使每步产率增加到 98% 。原因是光敏抗蚀剂的解离对照度的依赖是非线性的,当照度达到特定的阈值以上保护剂就会解离。所以,该方法同时也解决了由于蔽光膜透光孔间距离缩小而基因芯片引起的光衍射问题,有效地提高了聚合点阵的密度。另据报导 ,利用波长更短的物质波如电子射线去除保护可使点阵密度达到 1010/cm2 。
目前已有多种方法可以将寡核苷酸或短肽固定到固相支持物上。这些方法总体上有两种,即原位合成( in situ synthesis )与合成点样两种。支持物有多种如玻璃片、硅片、聚膜、纤维素膜、尼龙膜等,但需经特殊处理。作原位合成的支持物在聚合反应前要先使其表面衍生出羟基或氨基(视所要固定基因芯片的分子为核酸或寡肽而定)并与保护基建立共价连接;作点样用的支持物为使其表面带上正电荷以吸附带负电荷的探针分子,通常需包被以氨基硅烷或多聚赖氨酸等。