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- 南京英瀚斯生物科技有限公司
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- 发布时间
- 2023-01-08 11:46:31
选择实验外包公司需要注意哪些事项？
报价
报价单一定要有明细。规范的外包公司会根据实验方案里的各项内容进行核算报价，细胞实验外包公司，材料是多少、人工检测是多少，可以看到每一笔钱花在哪里，避免笼统的报价。另外注意不要一味地追求，做过实验的都知道实验成本，外包还需要考虑人工成本。如果价格过低，实验数据就难以保证可靠和来源了。当然报价也不能虚高，做好是能在有限的经费中尽量保证课题完整性。可以要求公司根据预算来调整优化方案，尽可能节约成本。
细胞培养中常见的污染及解决方法
真菌污染
真菌污染后，培养基一般清澈，保持原色。细丝可以在显微镜下观察到。，一些真菌类似于死细胞碎片，但其中许多清晰可见，看起来像珊瑚，比较容易区分。此外，细胞实验外包哪家好，它们会慢慢长出细细的黑色细丝，因为它们生长得比较慢，不像细菌那样容易被发现，一旦发现培养基被污染，它们将很难存活。
解决方法：一旦被真菌污染，果断丢弃，然后对细胞房、CO2 培养箱、器皿和培养基进行消毒。
细胞实验介绍——慢病毒建立稳转细胞系
慢病毒包装：公司使用3质粒慢病毒包装系统，慢病毒系统使用pLKO.1-EGFP、psPAX2、pMD2.G，过表达慢病毒系统使用pL、psPAX2、pMD2.G三质粒系统，将质粒混匀后使用磷酸钙转染方法转染至HEK293T细胞中，培养48h后，收集上清。使用genecopo公司慢病毒颗粒纯化试剂盒将慢病毒纯化。纯化后留取部分检测病毒滴度，其余病毒冻存于-80℃冰箱中。
滴度检测：将病毒颗粒使用梯度稀释，分别293T细胞，72h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况。根据细胞荧光量计算病毒滴度。
细胞：在病毒前一天对细胞进行计数，接种约10000个细胞于12孔板中，绍兴细胞实验，培养过夜后使用无培养基稀释病毒，加入12孔板中对细胞进行，病毒数量根据推荐细胞的MOI加入（若无推荐MOI，需做病毒梯度：1，5，10，50，100 5个梯度对细胞），6h后去除含病毒溶液，加入完全培养基细胞培养，培养48h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光强度。同时加入puromycin对细胞筛选，筛选约2周时间。细胞筛选好后，使用定量PCR和Western blot检测目的基因的稳定表达情况。
实验流程：慢病毒质粒构建-HEK293T细胞培养-质粒转染293T细胞-病毒收集-病毒纯化-病毒滴度检测-细胞-稳转细胞筛选-稳转细胞鉴定
结果示例：
图 A 病毒滴度检测；B 目的细胞病毒效果图