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- 发布时间
- 2020-10-27 10:12:42
灵敏度
通过比较10个B0孔平均光密度值(OD)和10个5号管标准品的平均光密度值，计算出灵敏度。cAMP浓度的检测极限通过标准曲线上0位置的两个标准偏差来测定。
OD(B0平均数) =0.685± 0.003
OD（5号 标准品平均数）=0.604± 0.010
光密度偏差(0-0.4 pmol/mL) =0.081
2 SD"s of the Zero Standard =0.006
灵敏度 =08×0.4 pmol/mL =29.6 fmol/mL
使用前将各种试剂取出放置30分钟，平衡至室温。所有标准品和样品必需设置平行对照实验。
快速加入试剂至样品中，立即漩涡震荡2秒混匀。
1. 依据实验键盘纸决定酶标条的使用量，将剩余的酶标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。
2. 移取50μL中和液至各个微孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。
3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔和B0孔(0 pmol/mL cAMP标准品)。
4. 移取100μL cAMP标准品至相应的孔。
5. 移取100μL样品至相应的孔。
6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB(非特异结合)孔。7. 移取50μL 偶联酶至各孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。
8. 移取50μL 抗l体工作液至各孔中，除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特异结合)孔。
9. 将酶标孔置于孔板振动器上，250~500rpm，室温孵育2小时。
10. 在吸水纸上拍干微孔内溶液，加洗涤液400μL每孔洗3次，每次需拍干。
11. 后一次洗涤，清空各微孔，在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次，以确保没有洗涤液残留。
12. 加5μL 偶联酶至TA(全活性)孔。
13. 每孔200μL显色底物溶液，于室温静置5~30分钟。（显色底物A和B需在临用前15分钟内等体积混合，并避光放置。）
14. 每孔加入50μL终止液。终止后立即读数。
15. 清除酶标l仪Blank(空白)孔值，读取450nm处的光密度值，人环磷酸腺苷 cGMP ELISA，在570nm至590nm之间有修正。如果酶标l仪不能自动清除Blank(空白)孔值，那么手动扣除每个读数的Blank(空白)孔光密度值。
武汉纽斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美国生命科学试剂供应商美国NewEastBio在中国的子公司。美国NewEastBio专注于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、ELISA试剂盒、蛋白等，与世界高校和研究所、世界大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往全球。
环磷酸鸟苷（鸟苷-3′，5′-环化一磷酸，cGMP）在许多生理过程中发挥着重要的调控作用。cGMP由鸟苷酸环化酶产生，而被磷酸二酯酶降解，因此激l活鸟苷酸环化酶或者抑制磷酸二酯酶可以提高细胞内cGMP的含量。研究发现，cGMP特异性磷酸二酯酶的抑制l剂可用于治l疗人类疾病。