化妆品牛角膜浑浊度和渗透性试验方法

化妆品牛角膜浑浊度和渗透性试验方法

化妆品牛角膜浑浊度和渗透性试验（BCOP）方法，是评估化妆品对角膜潜在刺激性的体外试验。其核心步骤包括使用专门的角膜夹持器固定牛眼角膜，并利用浑浊度仪测量和记录样品对角膜的浑浊度（混浊度）和渗透性。此方法是中国国家药品监督管理局新增的检验方法之一，自2026年3月1日起正式实施。

BCOP试验原理

化学品接触牛角膜后，会导致角膜透明度下降（浑浊度↑）及角膜屏障受损（渗透性↑）。

通过检测浑浊度及荧光素钠透过量，计算体外刺激分数（IVIS/LIS），用以判断眼刺激性等级。

BCOP试验步骤

●角膜准备与装载

挑选无浑浊、划痕和血管生成等缺陷的牛眼，沿巩膜边缘剪取角膜并剥离后置于 Hanks’ 溶液中。将角膜内皮面朝下放入夹持器后室，对准 O 型环后盖上前室并旋紧，确保密封无漏液。

●平衡与基准浑浊度测定

向前后室加入 32 ℃ 预热的 MEM 培养液，并保证无气泡。将夹持器垂直放入 32±1 ℃ 恒温设备中平衡 1 h。平衡结束后更换培养液，用浑浊度仪测定角膜初始浑浊度；仅筛选浑浊度在规定范围内的角膜用于试验。

●角膜分组与受试物设置

将合格角膜分配至受试物组、阳性对照组和阴性对照组，每组不少于 3 个。根据受试物类型选择适当暴露条件：

液体与表面活性剂：原液或规定浓度，暴露 10 min。

非表面活性剂固体：制成 20% 悬液，暴露 4 h。

根据受试物黏度选择直接加样或开窗加样，确保样品均匀覆盖角膜表面。

●暴露结束后的处理与浑浊度测量

暴露完成后吸除受试物，使用含酚红 MEM 冲洗三次，再以无酚红 MEM 冲洗至培养液无色。随后加入新鲜培养液测定浑浊度。

液体受试物需再于 32±1 ℃ 孵育 2 h 后再次测定浑浊度；固体受试物以暴露后第一次测量值为最终浑浊度。计算每个角膜的浑浊度变化。

●渗透性测定（光密度）

将前室培养液吸除后加入荧光素钠溶液（按受试物类别选择浓度），保持前室向上水平放置并在 32±1 ℃ 下孵育 90 min。取后室液体测定 490 nm 的光密度值，必要时进行稀释以保持在线性范围内。计算每组角膜的平均光密度。

●体外刺激分数计算与结果判定

根据仪器光源类型选择公式：

IVIS（白光）= 浑浊度变化 + 15 × 光密度

LIS（单色光）= 浑浊度变化（lux/7） + 15 × 光密度

BCOP眼刺激性等级判定

依据体外刺激分数判定受试物是否为无刺激性、不可逆眼损伤或需进一步确认的类别。

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