lipo3000转染试剂 博特龙公司

使用方法：

1. 转染前 18~24 小时接种细胞到 24 孔细胞板中，每孔 5~10×104细胞，1ml 完全培养基。备注：如果筛选抗药性稳定细胞系，可以考虑简化的实验步骤，即在细胞传代后直接按下述步骤 2~5 进行转染，无需 18~24 小时的等候时间。

2. 将 2μg 质粒 DNA 和 3~5μl 转染试剂分别稀释到 50μl 生理盐水中。备注：质粒 DNA 和转染试剂的zui适用量需要根据不同培养基来优化，但理论上不超出 1~2μg 和 3~5μl 范围。

3. 合并上述两溶液并混匀。备注：无需其它转染试剂所需的 10~30 分钟的等候时间。

1. 将上述复合物直接加入到细胞培养基中，轻摇细胞板或用加样器吸打混匀。备注：转染复合物可直接加入含血0清的细胞培养基中进行转染。在极0少情况下会出现贴壁细胞脱落现象，可先从待转染细胞孔中吸取 500μl 培养基与转染复合物预混后再加入细胞中。若在细胞瓶中进行转染，直接加入到无细胞贴壁的对面或侧面并摇匀即可。

2. 将细胞板移至 37oC/5% CO2 孵箱中进行培养。备注：无需在转染后 4~6 小时补加血0清或更换培养基。

3. 24~72 小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。

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磷酸钙沉淀法

磷酸钙沉淀法师基于磷酸钙-DNA复合物将DNA倒入真核细胞的转染方法。磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与ba细胞表面的结合。当核酸以磷酸高-DNA复合物的形式出现时，可使DNA附在细胞表面，利于细胞的吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内。进入细胞的DNA仅有1%-5%可以进入细胞核中，lipo3000转染试剂，其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率约为10-4，这项技术能用于任何DNA导入哺乳动物细胞进行暂时性的表达或长期的转化研究。

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