检测技术服务:Edman方法为什么只可用于确定不超过约50个氨基酸的蛋白质序列

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北京百泰派克生物科技有限公司
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百泰派克生物科技
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2023-12-14 18:32:03
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关键词:Edman方法为什么只可用于确定不超过约50个氨基酸的蛋白质序列,蛋白质组学,代谢组学,tmt,抗体测序,itraq,蛋白质谱鉴定,蛋白质组学,代谢组学,tmt,抗体测序,itraq,蛋白质谱鉴定

蛋白质是维持生物体正常生理活动的重要分子。它们决定了细胞的结构和活性,为细胞和组织之间的信号传导提供了机制,并催化了支持新陈代谢的化学反应。蛋白质结构决定了功能(或功能障碍)。

Edman降解(Edman degradation)法是测定蛋白质序列的主要手段。在此过程中,异硫氰酸苯酯(PITC)与N-末端自由α-残基反应形成苯基硫代氨基甲酰基(PTH)衍生物,随后裂解以产生噻唑啉酮衍生物(ATZ)和新的N-末端。释放的苯异硫尿氨基酸(PTH-氨基酸)是稳定的,使用电泳或高效液相色谱法鉴定;在第一个氨基末端残基游离后,对剩余的多肽链循环相同反应,则可游离出下一位置的残基,重复该循环过程可揭示多肽的完整序列信息。

Edman降解通过化学反应可以将氨基酸一个一个鉴定出来,但该方法速度慢(一个周期1h)。并且通过循环衍生化jǐn限于能够可靠地测定肽链的30个左右氨基酸残基序列,zuì多可以分析50-60个氨基酸残基。

一些技术可以在此基础上再提高检测限度,但这种操作也会丢失一些蛋白整体的信息且检测精度也大大下降,导致无法区分很多接近的质量信号。若样品纯度达到要求且蛋白N-末端有游离α-残基,它需要大约100 pmol的纯肽样品,每个氨基酸的识别效率>99%。若Edman降解在N-末端没有游离α-残基(N-末端封闭或者被化学修饰)情况下,则不能明确识别到检测信号,因此不能用于准确检测并鉴定翻译后修饰的蛋白。

百泰派克生物科技采用岛津公司Edman测序系统,为广大科研工作者和科研客户提供基于Edman降解的蛋白质N端测序服务。采用我们的测序系统,可以测定N端30个氨基酸的序列信息。采用特定的蛋白上样系统,可以测定N端的60-70个氨基酸。百泰派克生物科技也建立了以先jìn的LC-MS/MS技术进行N-端测序的平台,可以测出封闭和修饰的蛋白质末端,与基于Edman降解的蛋白质N端测序形成互补,保证N端测序服务的顺利进行。


百泰派克生物科技-生物药物表征,生物质谱多组学优质服务商
北京百泰派克生物科技有限公司(Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP)从事以生物质谱为依托的生物药物表征,大分子物质(包括蛋白质、多肽、代谢物)质谱分析以及小分子物质检测服务。

公司采用ISO9001质量控制体系,专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务;

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