食品微生物学检验β型溶血性链球菌检验GB/T4789.11-2014第三方检测机构，GB/T4789.11-2014检测

GB 4789.11-2014《食品安全国家标准 食品微生物学检验 β型溶血性链球菌检验》规定了食品中β型溶血性链球菌的检验方法，适用于各类食品的检测。以下是该标准的核心内容：

一、适用范围

本标准适用于食品中β型溶血性链球菌的检验，包括但不限于肉类、乳制品、水产品、饮料、蔬菜、谷物及其制品等。

二、生物学特性

β型溶血性链球菌是一类在血平板上能形成β型溶血圈的细菌，主要包括酿脓（或A群）链球菌及无乳（或B群）链球菌。其生物学特性如下：

形态与染色：革兰氏阳性菌，呈球形或椭圆形，常呈链状排列，长短不一。

培养特性：需氧或兼性厌氧菌，营养要求较高。在血平板上形成灰白色、半透明、光滑、圆形、边缘整齐的菌落，周围可见β型溶血形成透明区。

抵抗力：对热、干燥等环境因素较为敏感，但对杆菌肽、青霉素、红霉素和磺胺等药物敏感。

三、检验程序

样品处理：

称取25g（或25mL）检样，加入225mL改良胰蛋白胨大豆肉汤（mTSB）中，均质后制成1:10的匀液。

液态样品可直接振荡均匀后取样。

增菌培养：

将匀液置于36℃±1℃恒温培养箱中培养18-24小时。

分离培养：

取增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂平板上，36℃±1℃厌氧培养18-24小时。

观察菌落形态，β型溶血性链球菌的典型菌落为灰白色、半透明、光滑、圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。

鉴定：

革兰氏染色镜检：挑取可疑菌落进行革兰氏染色，β型溶血性链球菌为革兰氏阳性球菌，呈球形或卵圆形，常排列成短链状。

触酶试验：挑取可疑菌落，滴加3%，立即产生气泡者为阳性（β型溶血性链球菌触酶为阴性）。

链激酶试验（选做）：用于进一步确认β型溶血性链球菌的鉴定结果。

生化鉴定：使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡对可疑菌落进行鉴定。

四、结果判定

综合菌落形态、溶血特征、革兰氏染色及生化试验结果，判定样品中是否检出β型溶血性链球菌。

报告每25g（或25mL）检样中检出或未检出溶血性链球菌。

五、注意事项

样品处理：对于易产生较大颗粒的样品（如肉类），建议使用带滤网均质袋，以方便均质后用吸管吸取匀液。

增菌培养：使用均质袋进行前增菌时，应使用带有底托的均质袋架子，防止培养过程中前增菌袋子歪倒泄漏污染培养箱。

鉴定：在使用全自动微生物分析系统进行鉴定时，应结合其他生物学特性综合评价后判断结果。如遇待测菌鉴定评分过低、多个生化反应结果不符或48小时生化反应仍不明显的情况，应考虑链球菌乳化程度不够、呈颗粒状、不能形成均匀的菌悬液有关，此时应重复试验或改用其它方法鉴定。

培养箱管理：培养箱中叠放培养皿时，为防止中间平皿过热，高度不得超过6个平板。

质量控制：实验室过程中，每批预增菌液、选择性增菌液、分离平板等都要做空白对照，以掌握检验过程中是否存在来自检验环境的污染。定期使用β型溶血性链球菌ATCC19615或相应定量活菌参考品进行阳性实验验证，验证实验至少每2个月进行1次。每2个月将所使用的培养基和生化试剂用标准菌株或阴性菌株进行验证，并进行记录。