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电泳实验技术原理

电泳实验的技术原理

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电泳是带电颗粒在电场作用下，向着与其电荷相反的电极移动的现象。在一定pH条件下，每一种分子都具有特定的电荷（种类和数量）、大小和形状，在一定时间内它们在相同电场中泳动速度不同，各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。这就是带电粒子可以用电泳技术进行分离、分析和鉴定的基本原理。

带电颗粒在电场中泳动的速度称迁移率或泳动度。

电泳时，带电颗粒（球形）在介质中受力平衡匀速运动，则有：

v = F阻/f = FE/f = E·q/f = E·q/(6π·r·η)

v — 泳动度 F阻 — 颗粒所受阻力

E — 电场强度 q — 颗粒所带电荷

r — 颗粒半径 η — 介质黏度

FE — 颗粒所受电场力 f — 摩擦系数

由上式可见：泳动度与球形分子半径、介质粘度、颗粒所带电荷以及电场强度有关。 非球形分子（如线状DNA）在电泳过程中受到更大的阻力，即粒子的泳动度与粒子形状有关。

影响电泳快慢的重要因素

影响电泳实验泳动速度的重要因素——支持物

电泳实验多在固体支持物上进行，使样品中的不同组分形成不同的区带，称区带电泳。电泳结束后，支持物可以方便地进行染色等后续处理。

对支持物的一般要求是均匀，吸附力和电渗小，机械性能好，便于染色或紫外光下检测。常用支持物有SDS——PAGE凝胶，琼脂糖凝胶、滤纸，醋酸纤维素薄膜等 ， 支持物性质不同也会影响泳动速率，如琼脂糖和聚酰胺凝胶都有大小不同的筛孔，在筛孔大的凝胶中溶质颗粒的泳动速率快，小型转印电泳槽厂家，反之则慢。

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蛋白质在SDS-PAGE电泳中，迁移率只和其分子量相关

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PAGE据其有无浓缩效应，分为连续系统与不连续系统，连续系统电泳体系中缓冲液pH值及凝胶浓度相同，带电颗粒在电场作用下，主要靠电荷及分子筛效应；不连续系统电泳体系中由于缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性，带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应、分子筛效应，还具有浓缩效应，故分离效果更好。不连续的凝胶作为支持介质，利用凝胶层的不连续性、缓冲液离子的不连续性、PH的不连续性及电位梯度的不连续性，使样品在不连续的两相间积聚浓缩成很薄的起始区带，然后进行分离。

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