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转印电泳

转印电泳的分类及注意事项：

Western Blotting（蛋白质单项电泳后印迹转移）

Eastern Blotting（蛋白质双向电泳后印迹转移）

Southern Blotting（DNA印迹） Northern Blotting（RNA印迹）

在转印过程中要控制温度 ，在低温或者冷循环条件下进行

对于分子量大于100KD的蛋白质大分子不用半干转

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影响电泳快慢的重要因素

影响电泳实验泳动速度的重要因素——支持物

电泳实验多在固体支持物上进行，使样品中的不同组分形成不同的区带，称区带电泳。电泳结束后，支持物可以方便地进行染色等后续处理。

对支持物的一般要求是均匀，吸附力和电渗小，机械性能好，便于染色或紫外光下检测。常用支持物有SDS——PAGE凝胶，琼脂糖凝胶、滤纸，Western blot，醋酸纤维素薄膜等 ， 支持物性质不同也会影响泳动速率，如琼脂糖和聚酰胺凝胶都有大小不同的筛孔，Western blot公司，在筛孔大的凝胶中溶质颗粒的泳动速率快，Western blot供应商，反之则慢。

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蛋白电泳样品的浓缩效应

1：凝胶孔径的不连续性：

浓缩胶为大孔胶；分离胶为小孔胶。在电场作用下，样品颗粒在

大孔胶中泳动的阻力小，移动速度快；当进入小孔胶时，受到的阻

力大，移动速度减慢。因而在两层凝胶交界处，样品迁移受阻而压

缩成很窄的区带。

2： 电位梯度的不连续性：

电泳开始后，快离子的快速移动会在其后形成一个离子强度很低 的低电导区，使局部电位梯度增加，将蛋白质浓缩成狭窄的区带

大多数蛋白质在pH6.7或8.3时均带负电荷，在电场中，都向正极移动。

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