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检测技术服务:IP后跑胶

发布时间:2023-12-14 11:07  点击:7次

检测技术服务:IP后跑胶--检测技术服务详情

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在获得免疫沉淀(IP)样品之后,由于质谱检测的成本相对较高,需要在IP样品进行质谱检测之前进行IP后跑胶预实验。通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分别进行蛋白质印迹(Western blot,WB)及银染或考染预实验,评估该IP样品是否适用于质谱检测。通过SDS-PAGE电泳和银染或考染预实验可评估IP样品蛋白量,WB预实验可评估IP所用抗体的特异性和亲和富集效率。

通过加入SDS-PAGE试剂制作SDS-PAGE凝胶板,加入IP样品进行凝胶电泳跑胶,跑胶过程: 先将电压设置为80 V,待样品进入分离胶后,调整电压为100-150 V。当溴酚蓝接近前沿时,停止电泳。若IP样品分子量较小,则注意前沿位置及时停止电泳。若IP样品分子量较大,可以延长电泳时间。全程大约需要1-2 h。

电泳后通过考马斯亮蓝染色,若SDS-PAGE染色结果表明IP样品中蛋白量较高且差异明显,质谱检测可分析出明显的蛋白差异从而鉴定相互作用蛋白,则可继续进行IP样品质谱送样检测。将蛋白条带用干净的刀片切下,装入EP管中及时送样。用于质谱检测的胶条样品大小要求胶条以 1 cm*1 cm 为宜(胶条过大容易导致酶解效率低,建议分成多份进行酶解)。送样时需加冰袋维持低温,否则应该优化和更改实验条件,重新制备样品后,再进行质谱检测。

百泰派克生物科技结合MALDI-TOF质谱系统与LC-MS/MS质谱系统,提供专业准确的蛋白胶点、胶条以及IP样品,CO-IP样品蛋白鉴定服务。可鉴定的样品包括但不限于:1D-SDS PAGE分离的蛋白胶条,2DE PAGE中的蛋白胶点,蛋白表达产物,免疫共沉淀(Co-IP)样品。只需要将您的实验目的告诉我们并寄送样品,百泰派克生物科技将会负责完成样品处理、上机分析、数据分析、项目报告等项目后续服务。


百泰派克生物科技-生物药物表征,生物质谱多组学优质服务商
北京百泰派克生物科技有限公司(Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP)从事以生物质谱为依托的生物药物表征,大分子物质(包括蛋白质、多肽、代谢物)质谱分析以及小分子物质检测服务。


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