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抗果蝇 MRJ 蛋白单克0隆抗0体的制备和鉴定

摘要: 制备抗 果 蝇 MRJ 蛋白单克0隆抗0体可用于研究果蝇 mrj 的 生 物 学 功 能，使 用 IPTG 诱 导 重 组 质 粒pET28a-mrj 在大肠杆0菌 Rosetta 中表达，重组蛋白经过 Ni-IDA 凝胶柱亲和纯化后免0疫 BALB/c 小鼠。然后取免0疫好的小鼠的脾0脏细胞与小鼠骨0髓瘤细胞 SP2 /0 融合，经克0隆和筛选获得了能分泌抗果蝇 MRJ 蛋白单克0隆抗0体的杂交瘤细胞株。腹0水制备后获得单克0隆抗0体，核酸染料，通过 ELISA 和 Western Blot 对所获得的抗0体进行鉴定，结果表明所制备单克0隆抗0体能够特异性结合于原核及真核细胞表达的 MRJ 蛋白，可用于研究 mrj 基因的生物学功能。

关键词: mrj; 细胞融合; 单克0隆抗0体

通过后腿小腿肌肉注射免0疫小鼠（视频），每只小鼠注射100μl。

备注：本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象，抽入针管前应充分混匀，抽入针管后应尽快注射。

第21天按同样方式加强免0疫1针。

备注：每次佐剂和抗原现配现用。

第35天采微量尾血进行ELISA测定，抗0体滴度应在1:10000-1:10000000范围内，随后即可采全血或按常规方法进行抗原冲击免0疫和脾细胞融合。

材料与方法

一、材料

AFP购自上海领潮公司。SP2／0骨0髓瘤细胞(中科院上海细胞库)。8～12周龄Balb／c小鼠(第四军0医大学实验动物中心)。SPF级。

二、方法

1．动物免0疫：将4只8～12周龄Balb／c小鼠随机分为两组，每组2只，分别命名为1号和2号(第yi组)、3号和4号(第二组)。第yi组按常规免0疫方法进行免0疫一…，第二组采用改良的免0疫方法进行免0疫。免0疫前静脉采集少量血液，析出血0清作为后续检测的阴性对照血0清。

第yi组：AFP50ug(50肚1)与等量福氏完全佐剂(Sigma，美国)混合，充分乳化后注入8～12周龄Balb／c小鼠腹腔，2周后用同量抗原加不完全福氏佐剂(Sigma，美国)腹腔注射，4周后用同量抗原加不完全福氏佐剂腹腔注射，融合前3 d作腹腔注射加强免0疫。

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