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蛋白电泳问题处理

蛋白电泳中经常出现的问题和解决方法

1：“微笑”(两边翘起中间凹下)形带，主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所

致，多出现于较厚的凝胶中。 处理办法：待其充分凝固再作后续实验。

2： “皱眉”(两边向下中间鼓起)形带

主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。

处理办法：在两板间加入适量缓冲液，以排除气泡。

3：出现拖尾现象?

主要是样品融解效果不佳、样品降解或分离胶浓度过大引起的。

处理办法：加样前离心;选择适当的样品缓冲液；电泳缓冲液时间过长，重新配制

4：电泳的条带很粗?

电泳中条带很粗是常见的事，主要是未浓缩的原因。

处理办法：适当增加浓缩胶的长度; 保证浓缩 胶贮液的pH正确(6.7);适当降低电压

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影响电泳快慢的重要因素

影响电泳实验泳动速度的重要因素——支持物

电泳实验多在固体支持物上进行，使样品中的不同组分形成不同的区带，称区带电泳。电泳结束后，支持物可以方便地进行染色等后续处理。

对支持物的一般要求是均匀，吸附力和电渗小，机械性能好，便于染色或紫外光下检测。常用支持物有SDS——PAGE凝胶，琼脂糖凝胶、滤纸，电泳槽，醋酸纤维素薄膜等 ，转印电泳槽， 支持物性质不同也会影响泳动速率，如琼脂糖和聚酰胺凝胶都有大小不同的筛孔，在筛孔大的凝胶中溶质颗粒的泳动速率快，反之则慢。

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蛋白电泳样品的浓缩效应

1：凝胶孔径的不连续性：

浓缩胶为大孔胶；分离胶为小孔胶。在电场作用下，样品颗粒在

大孔胶中泳动的阻力小，移动速度快；当进入小孔胶时，受到的阻

力大，移动速度减慢。因而在两层凝胶交界处，样品迁移受阻而压

缩成很窄的区带。

2： 电位梯度的不连续性：

电泳开始后，快离子的快速移动会在其后形成一个离子强度很低 的低电导区，使局部电位梯度增加，将蛋白质浓缩成狭窄的区带

大多数蛋白质在pH6.7或8.3时均带负电荷，在电场中，都向正极移动。

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