GB/T 14926.16-2001《实验动物 乙型溶血性链球菌检测方法》标准检测解析
一、标准基本信息
标准编号：GB/T 14926.16-2001
发布日期：2001年8月29日
实施日期：2002年5月1日
主管部门：科学技术部
归口单位：全国实验动物标准化技术委员会（TC281）
起草单位：中国实验动物学会
标准状态：现行有效（最近一次复审于2023年12月28日，为继续有效）
替代标准：全部代替GB/T 14926.16-1994
二、标准适用范围
本标准适用于小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠和兔等实验动物的乙型溶血性链球菌检测。
三、检测方法概述
乙型溶血性链球菌是β溶血性的革兰阳性球菌，呈链状排列，具有链激酶试验阳性等生化特征。可通过菌落生长、菌体和生化反应特征进行鉴定。
四、检测方法详解
样本采集
采集部位：呼吸道分泌物或病灶组织、分泌物。
采集原则：严格无菌操作，避免交叉污染。样本应新鲜，具有代表性。
保存与运输：样本需4℃冷藏保存，24小时内送检。超过时限需冷冻保存，解冻后立即检测。
分离培养
培养基选择：使用血琼脂平皿进行分离培养。
培养条件：将已接种的血琼脂平皿置于（36±1）℃培养18-24小时。
菌落特征：在血琼脂平皿上形成1.0mm左右，灰白色圆形，凸起，半透明或不透明，表面光滑，周围有2-4mm界限分明，无色透明溶血环（β溶血）的小菌落。
鉴定
链激酶试验阳性：吸取草酸钾人血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入24小时（36±1）℃培养的链球菌培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，振荡摇匀，置于（36±1）℃水浴中10分钟，血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24小时后不溶解即为阴性。
杆菌肽敏感试验阳性：待检菌株纯培养物涂布于血琼脂平皿上，用灭菌镊子取每片含有0.04单位的杆菌肽纸片，放于琼脂表面，于（36±1）℃培养24小时，如有抑菌带出现即为阳性，用已知阳性菌株作为对照。
菌体特征：革兰阳性，球形或椭圆形，直径0.6-1.0μm，呈链状排列，短者4-8个，长者20个左右。
生化试验：
五、结果判定
阳性报告：凡符合上述各项检测结果者作出阳性报告，即菌体为革兰阳性球菌，呈链状排列，链激酶试验阳性，杆菌肽敏感试验阳性，且菌落具有β溶血特征者，可判定为乙型溶血性链球菌。
阴性报告：不符合者作出阴性报告。